Investigation acide nucléique nouvelle d'ACP-fluorescence de kit de détection du syndrôme respiratoire aigu grave COVID-19 (2019-NCoV)
Kit diagnostique acide nucléique nouveau du syndrôme respiratoire aigu grave (2019-nCoV)
(Investigation d'ACP-fluorescence)
Utilisation prévue
Le kit diagnostique acide nucléique nouveau du syndrôme respiratoire aigu grave (2019-nCoV) (investigation d'ACP-fluorescence) est employé pour la détection qualitative des gènes d'ORF1ab et de N du syndrôme respiratoire aigu grave nouveau (2019-nCoV) dans l'écouvillon nasopharyngal, l'écouvillon oro-pharyngé, le fluide de lavage alvéolaire, le crachat, le sérum, le sang total et les résidus des cas suspectés de pneumonie avec l'infection nouvelle de syndrôme respiratoire aigu grave, les patients avec les groupes suspectés d'infection nouvelle de syndrôme respiratoire aigu grave, et d'autres patients ayant besoin du diagnostic ou du diagnostic différentiel de l'infection nouvelle de syndrôme respiratoire aigu grave.
Pour l'usage diagnostique in vitro seulement. Pour à usage professionnel seulement.
Résumé
Les définitions « des cas suspectés » et « ont suspecté que des groupes de patients » soient définis en se rapportant au « diagnostic de pneumonie et au programme thérapeutique pour l'infection nouvelle de syndrôme respiratoire aigu grave » et « au programme de contrôle de cas de pneumonie pour l'infection nouvelle de syndrôme respiratoire aigu grave » publiée par CDC de la Chine (le currentversion).
Syndrôme respiratoire aigu grave nouveau que (2019-nCoV) le kit diagnostique acide nucléique (investigation d'ACP-fluorescence) est seulement employé pour le diagnostic auxiliaire des points de droit relatifs et la réservation de secours pour le diagnostic in vitro pendant la manifestation de pneumonie d'infection nouvelle du syndrôme respiratoire aigu grave (2019-nCoV) depuis December2019, ce kit ne devrait pas être employé en tant que diagnostic in vitro courant dans la pratique clinique. Veuillez suivre les conditions appropriées du « diagnostic et programme thérapeutique de pneumonie pour l'infection nouvelle de syndrôme respiratoire aigu grave », la « prévention de pneumonie et le programme de gestion pour l'infection nouvelle de syndrôme respiratoire aigu grave » et d'autres documents en service.
Les essais acides nucléiques de syndrôme respiratoire aigu grave nouveau devraient être conformes « aux directives techniques pour l'essai en laboratoire du syndrôme respiratoire aigu grave nouveau à la CDC de la Chine » et garder la bonne sécurité biologique.
Principe d'essai
En appliquant la technologie quantitative de la fluorescence en temps réel RT-PCR sur l'instrument quantitatif d'ACP de fluorescence, cet essai utilise le syndrôme respiratoire aigu grave nouveau (2019-nCoV) ORF1ab et l'ordre conservé spécifique de coder le gène de la protéine N de nucleocapsid comme régions de cible qui sont conçues pour l'ordre conservé des gènes de double-cible, pour réaliser la détection de l'ARN témoin par les changements fluorescents de signal.
Les utilisations de système de détection d'ACP le contrôle interne positif, qui surveille la présence des inhibiteurs d'ACP dans des spécimens d'essai en détectant si le signal de commande interne est normal, d'éviter un résultat de faux négatif.
Composants du kit diagnostique
Ce kit est un réactif de réaction d'amplification et contient les composants suivants :
Note :
1. Ne mélangez pas ou n'échangez pas les composants de différents sorts de kit.
2. Tous les échantillons biologiques dans le kit diagnostique ont été inactivés.
3. Matériaux requis mais non fournis : tubes sans DNase et sans RNase de 1.5ml à centrifuger, tubes de réaction de l'ACP 0.2ml, astuces de pipette (10μL, les astuces 200μL and1000μL avec des filtres sont préférés), centrifugeuse de bureau, divers modèles de mélangeur de bureau de vortex des armes à feu de pipette.
4. réactif Auto-préparé : Réactif de libération témoin (numéro de référence : S1014E) ou réactif de version témoin (numéro de référence : S1015E extraction) ou de l'acide nucléique (DNA/RNA) ou kit de purification (méthode magnétique de perles) (numéro de référence : S1002E) construit par l'ARN viral Mini Kit (50) de Sansure Biotech Inc. ou de QIAamp construit par QIAGEN. Réactif de stockage d'échantillon, tel que le réactif de stockage d'échantillon (numéro de référence : X1002E) construit par Sansure Biotech Inc.
Instrument compatible
Le kit diagnostique s'applique à SLAN-96P, ABI7500, Life Technologies QuantStudio TM5, RocheCobas480, instrumentde l'ACPMA-6000.
Conditions de spécimen
1. Type applicable de spécimen : écouvillon nasopharyngal, écouvillon oro-pharyngé, fluide de lavage alvéolaire, crachat, sérum, sang total et résidus.
2. Collection de spécimen
Écouvillon nasopharyngal/écouvillon oro-pharyngé : Rassemblez l'échantillon selon les dispositions appropriées " de la méthode de collection de spécimen » « du guide technique de laboratoire de pneumonie pour l'infection nouvelle de syndrôme respiratoire aigu grave » de la « prévention de pneumonie et du plan de contrôle pour l'infection nouvelle de syndrôme respiratoire aigu grave ». On le montre que l'écouvillon a fait de la tête de échantillonnage en nylon et tige d'échantillonnage d'ABS peut être choisi pour la collection témoin.
Écouvillon nasopharyngal :
Le tube de collection de spécimen devrait être collé avec code barres d'abord, l'écouvillon nasopharyngal devrait être within3 rassemblé des jours après le début de la maladie aussi loin que possible. Utilisez l'écouvillon pour mesurer la longueur entre le nasi d'apex et le lobe de l'oreille, puis l'identifier par le doigt. Insérez l'écouvillon dans la fosse nasale dans la direction de la perpendiculaire au nez (visage). L'écouvillon devrait être inséré au moins à moitié de la longueur du lobe de l'oreille au nasi d'apex. Faites les arrêts d'écouvillon dans le for15 nasal | 30 s, doucement rotate3 | 5 fois, mettent rapidement l'écouvillon dans le tampon de lysis du tube cotaining2 ml de collection de spécimen (même que le tampon de lysis dans le réactif de libération témoin) ou prélèvent le réactif de stockage contenant l'inhibiteur d'enzyme d'ARN. Insérez l'écouvillon, puis cassez la tige stérile d'écouvillon près du dessus, serrer le chapeau de tube et le joint avec le film de cachetage.
Écouvillon oro-pharyngé :
Le tube de collection de spécimen devrait être collé avec code barres d'abord, l'écouvillon oro-pharyngé devrait être rassemblé d'ici 3 jours après le début de la maladie aussi loin que possible. Un écouvillon de flocage stérile devrait être utilisé pour l'échantillonnage, essuient modérément le mur pharyngeal postérieur, évitent de toucher la langue. Rapidement endroit un écouvillon stérile dans le tube de collection utilisé pour la collection de l'écouvillon oro-pharyngé. Cassez la tige stérile d'écouvillon près du dessus, serrez le chapeau de tube et le joint avec le film de cachetage.
Fluide de lavage alvéolaire :
Patients graves ou patients présentant la pneumonie qui progrès rapidement. Clinicien extract≥5ml BALF dans un conteneur 50ml aseptique marqué avec code barres et le couvercle à visser témoin par opération aseptique. Rassemblez le spécimen, puis serrez le chapeau de tube et le joint avec le film de cachetage.
Crachat :
Le tube de collection de spécimen devrait être collé avec code barres d'abord. N'ouvrez pas la voie aérienne pour rassembler des spécimens en rassemblant le crachat. Crachat de toux de Collect.deep dans une tasse de échantillonnage aseptique jetable avec le couvercle à visser, charge protéase K de 2 ml (1g/L) dans prélever la tasse. Rassemblez le crachat, puis serrez le chapeau de tube et le joint avec le film de cachetage. Envoyez à la détection à moins de la minute 30 aussi loin que possible. La protéase K ne devrait pas être ajoutée d'abord si des spécimens doivent être transportés au-dessus de longues distances.
Sang total :
Des prises de sang peuvent être rassemblées d'ici 7 jours après le début ou les patients critiques, ou les patients considérés avec la virémie. Le tube de collection de spécimen devrait être collé avec code barres d'abord. Rassemblez 2~4ml des prises de sang dans le tube de collection de sang de vide contenant l'anticoagulant d'EDTA.
Résidus :
Pour des patients présentant des symptômes gastro-intestinaux tels que la diarrhée à la partie de la maladie, résidus de la conserve 3~5g (dimension de soja). Le tube de collection de spécimen devrait être collé avec code barres d'abord. Rassemblez l'échantillon dans le tube de collection de spécimen avec le couvercle à visser contenant (l'inhibiteur d'enzyme d'ARN peut être ajouté quand les conditions laissent) puis le joint 2ml salin normal avec le film de cachetage.
Après collection témoin, on lui recommande de placer dans le réactif de stockage d'échantillon pour la conservation.
On l'a montré que la solution de conservation, telle que salin normal, tampon de TE, guanidine contenante de 2-4M (telle que le chlorhydrate de guanidine) peut également être employée en tant que réactif de stockage d'échantillon pour la conservation d'échantillon. Le réactif de stockage d'échantillon contenant la guanidine ne peut pas être directement adapté pour prélever le réactif de libération construit par Sansure Biotech Inc. pour l'extraction acide nucléique. S'il y a lieu, on lui recommande d'employer l'extraction de l'acide nucléique (DNA/RNA) ou le kit de purification (méthode magnétique de perles) (numéro de référence : S1002E) construit par Sansure Biotech Inc. ou l'ARN viral Mini Kit (50) de QIAamp construit par QIAGEN pour l'extraction acide nucléique.
3. Stockage et livraison des spécimens :
Des spécimens à examiner peuvent être immédiatement traités, des spécimens à examiner d'ici 24 heures peuvent être stockés à 4℃. Des spécimens qui ne peuvent pas être détectés d'ici 24 heures devraient être stockés à -70℃ ou ci-dessous (faute de conditions de stockage de -70℃, des spécimens à examiner peuvent être stockés à -20℃ pendant 10 jours, acide nucléique peuvent être stockés à -20±5℃ pendant 15 jours). Des cycles multiples de gel/dégel devraient être évités. Des spécimens devraient être transportés dans un broc congelé scellé avec de la glace ou dans une boîte scellée de mousse avec de la glace. L'inactivation des échantillons à 56℃ pour 30min n'affectera pas la détection de ce kit.
Contrôle de qualité
Le résultat d'essai est traité en tant que valide si toutes les conditions dans le mentionné ci-dessus sont remplies pour le même essai. Autrement le résultat d'essai est traité comme invalide et doit être retesté.
Chaîne de référence
Par la recherche sur des valeurs de référence, la valeur de référence de Ct du gène de cible est déterminée pour être 40, la valeur de référence de Ct du contrôle interne est déterminée à être 40.
Explication de résultat de détection
Il n'y a aucune courbe typique d'amplification de S-forme détectée au canal de FAM, de ROX et de SORTILÈGE (aucun Ct), ou au Ct > 40. On l'indique que la concentration du spécimen est si basse, ou il y a des substances parasites qui empêchent la réaction. Le résultat d'essai est invalide. Une enquête devrait être effectuée pour trouver et exclure les raisons, rassemble svp le spécimen encore et reteste les spécimens.
Stockage et stabilité
1. Le kit diagnostique devrait être stocké dans une poche scellée at-20±5°C et être protégé contre la lumière. Le kit est provisoirement valable 6 mois.
2. Veuillez se référer à la date de la date de fabrication et d'échéance sur le paquet externe.
3. Les réactifs maintiennent valide et stable dans la date d'échéance a sinon employé. Tant que le conteneur du réactif est ouvert, le gel/cycles de dégel ne devrait pas dépasser trois.
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